Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready Ettstegs qRT-PCR-kit
Beskrivningar
Detta kit använder ett unikt lyseringsbuffertsystem som snabbt kan frigöra RNA från odlade cellprover för RT-qPCR-reaktioner, vilket eliminerar den tidskrävande och mödosamma RNA-reningen.RNA-mallen kan erhållas på bara 7 minuter.Den 5×Direct RT Mix och 2×Direkta qPCR Mix-SYBR-reagenser som tillhandahålls av kitet kan snabbt och effektivt få kvantitativa PCR-resultat i realtid.
5×Direct RT Mix och 2×Direct qPCR Mix-SYBR har stark inhibitortolerans, och lysatet av proverna kan användas som mall för RT-qPCR direkt.Detta kit innehåller det unika RNA-högaffinitet Foregene omvänt transkriptas och Hot D-Taq DNA-polymeras, dNTPs, MgCl2, reaktionsbuffert, PCR-optimeringsmedel och stabilisator.
Specifikationer
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kitkomponenter
| Del I | Buffert CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffert ST | |
| Del II | DNA Eraser |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX referensfärg | |
| RNas-fri ddH2O | |
| Instruktioner | |
Egenskaper & fördelar
■Enkelt och effektivt: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prov erhållas på bara 7 minuter.
■ Provbehovet är litet, så lite som 10 celler kan testas.
■ Hög genomströmning: den kan snabbt detektera RNA i celler odlade i 384, 96, 24, 12, 6-brunnars plattor.
■ DNA Eraser kan snabbt ta bort frigjorda genom, avsevärt minska påverkan på efterföljande experimentella resultat.
■ Optimerat RT- och qPCR-system gör tvåstegs RT-PCR omvänd transkription mer effektiv och PCR mer specifik och mer resistent mot RT-qPCR-reaktionshämmare.
Kitapplikation
Användningsområde: odlade celler.
- RNA frisatt genom provlys: endast tillämpligt på RT-qPCR-mallen i detta kit.
- Satsen kan användas för följande ändamål: genuttrycksanalys, verifiering av siRNA-medierad gentystnadseffekt, läkemedelsscreening, etc.
Diagram
Lagring och hållbarhet
Del I av detta kit bör förvaras vid 4 ℃;Del II bör förvaras vid -20 ℃.
Foregene Protease Plus II bör förvaras vid 4℃, frys inte vid -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR bör förvaras vid -20℃i mörkret;om den används ofta kan den också förvaras vid 4℃ för korttidsförvaring (använd inom 10 dagar).
Real Time PCR primer designprinciper
Forward Primer och Reverse Primer
För realtids-PCR är primerdesign mycket viktigt.Primers är relaterade till specificiteten och effektiviteten av PCR-amplifiering och kan utformas med hänvisning till följande principer:
Primerlängd: 18-30bp.
GC-halt: 40-60%.
Tm-värde: Primerdesignprogramvara, såsom Primer 5, kan ge primerns Tm-värde.Tm-värdena för uppströms och nedströms primers bör vara så nära som möjligt.Tm-beräkningsformeln kan också användas: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).När PCR utförs väljs i allmänhet en temperatur under primerns Tm-värde på 5 °C som glödgningstemperatur (motsvarande ökning av glödgningstemperaturen kan öka specificiteten för PCR-reaktionen).
Primers och PCR-produkter:
Designprimer PCR-amplifieringsproduktens längd är företrädesvis 100-150 bp.
Designprimers i mallens sekundära strukturella område bör undvikas så mycket som möjligt.
Undvik bildandet av 2 eller flera komplementära baser mellan 3'-ändarna av uppströms och nedströms primers.
Primer 3′ terminalbas kan inte finnas med ytterligare 3 på varandra följande G eller C.
Själva primrarna kan inte ha komplementära strukturer, annars kommer en hårnålsstruktur att bildas, vilket påverkar PCR-amplifieringen.
ATCG bör fördelas så jämnt som möjligt i primersekvensen, och den 3′-terminala basen bör undvikas som T.
Bilaga 1：Cell Direct RT-qPCR Kit komponenttilläggspaket
1.Celllyslösning
|
| |||
| Kitkomponenter (24-brunnars lyssystem / brunn) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deljag | Buffert CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffert ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DelII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Kitkomponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kitkomponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX referensfärg | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruktionsmanualer:
