Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolering Reningskit från cell
Kit Beskrivning:
Mycket renat och högkvalitativt totalt RNA kan erhållas från olika odlade celler på 11 minuter.
RNase-fri
Drivs i rumstemperatur (15-25 ℃)
Med DNA-rengöringskolonn
Högt RNA-utbyte
Snabbt: Avsluta extraheringen på 11 minuter
Säkerhet: Ingen Organisk kemikalie
Beskrivning
Detta kit använder spin-kolonnen och formeln utvecklad av Foregene, som effektivt kan extrahera hög renhet och högkvalitativt totalt RNA från celler odlade i 96, 24, 12 och 6-brunnars plattor.
Satsen tillhandahåller en effektiv DNA-rengöringskolonn, som enkelt kan separera supernatanten och cellysatet, binda och ta bort genomiskt DNA.Operationen är enkel och tidsbesparande.
TKolumnen endast för RNA kan effektivt binda RNA med en unik formel.Ett stort antal prover kan bearbetas samtidigt.
Kitkomponenter
| Kit sammansättning | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffert cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffert cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffert RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffert RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNas-fri ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-Endast kolumn | 50 | 200 |
| DNA-rengöringskolonn | 50 | 200 |
| Instruktion | 1 | 1 |
*Bär vänligen handskar och vidta skyddsåtgärder under operationen eftersom buffert cRL1 och buffert RW1 innehåller irriterande kaotropiska salter.
Egenskaper & fördelar
■ Hela processen körs i rumstemperatur (15-25 ℃), utan isbad och lågtemperaturcentrifugering.
■ Hela kitet är RNase-fritt, du behöver inte oroa dig för RNA-nedbrytning.
■ DNA-Cleaning Column binder specifikt DNA, så att kitet kan ta bort genomisk DNA-kontamination utan att lägga till ytterligare DNas.
■ Högt RNA-utbyte: Kolumn endast för RNA och unik formel kan effektivt rena RNA.
■ Snabb hastighet: lätt att använda och kan genomföras på 11 minuter.
■ Säkerhet: Inget organiskt reagens krävs.
■ Hög kvalitet: Det renade RNA:t är av hög renhet, fritt från protein och andra föroreningar och kan möta olika efterföljande experiment.
Kitapplikation
Den är lämplig för extraktion och rening av totalt RNA från odlade celler i 96, 24, 12 och 6-brunnars plattor.
Arbetsflöde
Diagram
Agarosgelbatteridiagrammet för Cell Total RNA Isolation Kit behandlade ovanstående olika antal celler, 20μl volymeluering, ta 2μl renat totalt RNA 1%.
Lagring och hållbarhet
Satsen kan förvaras i 12 månader i rumstemperatur (15–25 ℃) eller 2–8 ℃ under längre tid (24 månader).
Buffert cRL1 kan lagras vid 4 ℃ i 1 månad efter tillsats av 2-hydroxi-1-etantiol (valfritt).
RNA extraheras inte eller RNA-utbytena är låga
Det finns ofta en mängd olika faktorer som påverkar återhämtningseffektiviteten, såsom: vävnadsprovets RNA-innehåll, arbetssätt, elueringsvolym, etc.
1. Isbad eller kryogen (4 °C) centrifugering utfördes under drift.
Rekommendation: Kör i rumstemperatur (15-25 ° C) under hela processen, isbad inte och centrifugera vid låga temperaturer.
2. Felaktig provkonservering eller överdriven provlagringstid.
Rekommendation: Förvara prover vid -80 °C eller frys i flytande kväve och undvik upprepad frys-upptining;försök att använda färsk vävnad eller odlade celler för RNA-extraktion.
3. Otillräcklig provlysering.
Rekommendation: Vid homogenisering av vävnad, se till att vävnaden är tillräckligt homogeniserad och att vävnadscellerna är tillräckligt splittrade för att förklara frisättningen av RNA.
4. Eluenten är inte tillsatt korrekt.
Rekommendation: Bekräfta att RNase-Free ddH2O tillsätts droppvis till mitten av reningskolonnmembranet.
5. Den korrekta volymen absolut etanol tillsattes inte buffert RL2 eller buffert RW2.
Rekommendation: Följ instruktionerna, tillsätt korrekt volym absolut etanol till Buffer RL2 och Buffer RW2 och blanda väl innan du använder kitet.
6. Dosering av vävnadsprov är inte lämplig.
Rekommendation: Använd 10-20 mg vävnad eller (1-5) × 106celler per 500 μl buffert RL1, eftersom överdriven vävnadsanvändning kan resultera i minskad RNA-extraktion.
7. Felaktig elueringsvolym eller ofullständig eluering.
Rekommendation: Elueringsvolymen för reningskolonnen är 50-200 μl;om elueringseffekten inte är tillfredsställande, rekommenderas att förlänga placeringstiden i rumstemperatur efter tillsats av förvärmd RNase-fri ddH2O, t.ex. i 5-10 min.
8. Reningskolonnen har etanolrester efter tvätt med buffert RW2.
Rekommendation: Om det finns etanolrester efter tvättning med buffert RW2, centrifugering med tomma rör i 1 min, kan tiden för centrifugering med tomma rör ökas till 2 min, eller så kan reningskolonnen placeras i rumstemperatur i 5 minuter för att avlägsna resterande etanol på ett adekvat sätt.
Renat RNA bryts ned
Kvaliteten på det renade RNA:t är relaterat till faktorer som bevarandet av provet, RNas-kontamination och manipulation, etc.
1. Vävnadsprover hålls inte i tid.
Rekommendation: Om vävnadsprover eller celler inte används i tid efter insamling, kryokonservera omedelbart vid -80 °C eller flytande kväve.För att extrahera RNA, använd ett nytaget vävnads- eller cellprov när det är möjligt.
2. Upprepad frys-upptining av vävnadsprover.
Rekommendation: När du lagrar vävnadsprover är det bäst att skära dem i små bitar för konservering och ta bort en av bitarna när du använder dem för att undvika upprepad frys-tinning av provet och nedbrytning av RNA.
3. RNase införs eller inte bär engångshandskar, masker etc. under operationen.
Rekommendation: RNA-extraktionsexperiment utförs bäst i separata RNA-manipulationsrum och bordet rensas före experimentet.
Bär engångshandskar och -masker under experimentet för att minimera RNA-nedbrytning orsakad av införandet av RNase.
4. Reagenser är kontaminerade med RNas under användning.
Rekommendation: Ersätt med ett nytt Animal Total RNA Isolation Kit för relaterade experiment.
5. Centrifugerören, spetsarna etc. som används vid RNA-manipulation är kontaminerade med RNas.
Rekommendation: Bekräfta att de centrifugrör, spetsar, pipetter etc. som används vid RNA-extraktion alla är RNas-fria.
Renat erhållet RNA påverkar experiment nedströms
RNA renat av reningskolonnen, om saltjonerna, proteinhalten är för stor kommer att påverka nedströmsexperimentet, såsom: omvänd transkription, Northern Blot et al.
1. Det eluerade RNA:t har saltjonrester.
Rekommendation: Bekräfta att rätt volym etanol har tillsatts till buffert RW2 och utför två reningskolonntvättar vid den centrifugalhastighet som anges för drift;om det finns någon saltjonrester, lämna reningskolonnen till buffert RW2 i 5 minuter vid rumstemperatur och utför centrifugering för att maximera avlägsnandet av saltkontamination.
2. Etanolrest i eluerat RNA.
Rekommendation: Bekräfta att efter tvättning av buffert RW2, utför centrifugeringsoperationen med tomma rör vid den centrifugeringshastighet som anges för drift, öka tiden för centrifugeringen av det tomma röret till 2 minuter om det fortfarande finns etanolrester, eller låt det stå i rumstemperatur i 5 m
