Animal Total RNA Isolation Kit Total RNA-extraktion och reningskit för animaliska vävnader och celler
Kit Beskrivning:
Extrahera snabbt och effektivt totalt RNA av hög renhet och hög kvalitet från olika djurvävnader.
Du behöver inte oroa dig för RNA-nedbrytning.Hela systemet är RNase-fritt
Ta bort DNA effektivt med hjälp av DNA-rengöringskolonn
Ta bort DNA utan att lägga till DNas
Enkelt – alla operationer slutförs vid rumstemperatur
Snabb – operationen kan slutföras på 30 minuter
Säkert – inget organiskt reagens används
Hög renhet—OD260/280≈1,8-2,1
Kitbeskrivningar
50 förberedelser, 200 förberedelser
Detta kit användersnurra kolumn och formelutvecklat av vårt företag, som kan extrahera totalt RNA av hög renhet och hög kvalitet från olika djurvävnader med hög effektivitet. Det ger en effektiv DNA-rengöringskolonn, som enkelt kan separera och adsorbera genomiskt DNA från supernatanten och vävnadslysatet, enkelt och tidsbesparande;Kolumn endast för RNA kan effektivt binda RNA och kan bearbetas samtidigt med en unik formel Massor av prover.
Hela systemet är RNas-fritt, så att det extraherade RNA:t inte bryts ned;Buffert RW1, Buffer RW2 bufferttvättsystem, så att det erhållna RNA:t är fritt från föroreningar av protein, DNA, joner och organiska föreningar.
Kitkomponenter
| Animal Total RNA Isolation Kit | ||
| Kitkomponenter | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffert RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffert RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffert RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffert RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNas-fri ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Kolumn endast för RNA | 50 | 200 |
| DNA-rengöringskolonn | 50 | 200 |
| Instruktionsmanual | 1 del | 1 del |
Produktinformation
| Formatera | Snurra kolumn | Reningskomponent | Foregene kolonn, reagens |
| Flöde | 1-24 prover | Tid per förberedelse | ~30 min (24 prover) |
| Centrifug | Skrivbordscentrifug | Pyrolysseparation | Centrifugal separation |
| Prov | Djurvävnad;cell | Provmängd | Vävnad: 10-20 mg;Cell:(1-5)×106 |
| Elueringsvolym | 50-200 μL | Maximal laddningsvolym | 850 μL |
Egenskaper & fördelar
■ Du behöver inte oroa dig för RNA-nedbrytning;hela systemet är RNase-fritt
■ Ta effektivt bort DNA-användande DNA-rengöringskolonn
■ Ta bort DNA utan att lägga till DNas
■ Enkel-alla operationer utförs vid rumstemperatur
■ Snabb drift kan genomföras på 30 minuter
■ Säkert – inget organiskt reagens krävs
■ Hög renhet -OD260/280≈1,8-2,1
Kitapplikation
Den är lämplig för extraktion och rening av totalt RNA från en mängd färska eller frysta djurvävnader eller odlade celler.
Produktparametrar
■ Nedströmsapplikationer: första-strängs cDNA-syntes, RT-PCR, molekylär kloning, Northern Blot, etc.
■ Prover: djurvävnader, odlade celler
■ Dosering: vävnader 10-20mg, celler(2-5)×106
■ Maximal DNA-bindningskapacitet för reningskolonn: 80 μg
■ Elueringsvolym: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNA Isolation Kit behandlad 20 mg
Färska musprover, ta 5% renat totalt RNA 1% agar
Glykogelelektrofores
1: Mjälte 2: Njure
3: Lever 4: Hjärta
Lagring och hållbarhet
Satsen kan förvaras i 24 månader i rumstemperatur (15–25 ℃) eller 2–8 ℃ under längre tid.Buffert RL1 kan lagras vid 4 ℃ i 1 månad efter tillsats av β-merkaptoetanol (valfritt).
Citerade artiklar
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-laddade lipidliknande nanopartiklar för leverbasredigering via optimering av central kompositdesign.Adv.Funktion.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Spontan apoptos av celler i terapeutisk stamcellsframställning utövar immunmodulerande effekter genom frisättning av fosfatidylserin.Signal Transduct Target Ther.2021 14 juli;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-metylguanosin-tRNA-modifiering förbättrar onkogen mRNA-translation och främjar intrahepatisk kolangiokarcinomprogression.Mol Cell.2021 juli 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9,225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-medierad m6A-modifiering underlättar leverregenerering genom att upprätthålla endoplasmatisk retikulumhomeostas.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA-isoleringssatser för andra exempelkällorfinns tillgängliga:
Cell, växt, virus, blod, etc.
RNA extraheras inte eller RNA-utbytena är låga
Det finns ofta en mängd olika faktorer som påverkar återhämtningseffektiviteten, såsom: vävnadsprovets RNA-innehåll, arbetssätt, elueringsvolym, etc.
1. Isbad eller kryogen (4 °C) centrifugering utfördes under drift.
Rekommendation: Kör i rumstemperatur (15-25 ° C) under hela processen, isbad inte och centrifugera vid låga temperaturer.
2. Felaktig provkonservering eller överdriven provlagringstid.
Rekommendation: Förvara prover vid -80 °C eller frys i flytande kväve och undvik upprepad frys-upptining;försök att använda färsk vävnad eller odlade celler för RNA-extraktion.
3. Otillräcklig provlysering.
Rekommendation: Vid homogenisering av vävnad, se till att vävnaden är tillräckligt homogeniserad och att vävnadscellerna är tillräckligt splittrade för att förklara frisättningen av RNA.
4. Eluenten är inte tillsatt korrekt.
Rekommendation: Bekräfta att RNase-Free ddH2O tillsätts droppvis till mitten av reningskolonnmembranet.
5. Den korrekta volymen absolut etanol tillsattes inte buffert RL2 eller buffert RW2.
Rekommendation: Följ instruktionerna, tillsätt korrekt volym absolut etanol till Buffer RL2 och Buffer RW2 och blanda väl innan du använder kitet.
6. Dosering av vävnadsprov är inte lämplig.
Rekommendation: Använd 10-20 mg vävnad eller (1-5) × 106celler per 500 μl buffert RL1, eftersom överdriven vävnadsanvändning kan resultera i minskad RNA-extraktion.
7. Felaktig elueringsvolym eller ofullständig eluering.
Rekommendation: Elueringsvolymen för reningskolonnen är 50-200 μl;om elueringseffekten inte är tillfredsställande, rekommenderas att förlänga placeringstiden i rumstemperatur efter tillsats av förvärmd RNase-fri ddH2O, t.ex. i 5-10 min.
8. Reningskolonnen har etanolrester efter tvätt med buffert RW2.
Rekommendation: Om det finns etanolrester efter tvättning med buffert RW2, centrifugering med tomma rör i 1 min, kan tiden för centrifugering med tomma rör ökas till 2 min, eller så kan reningskolonnen placeras i rumstemperatur i 5 minuter för att avlägsna resterande etanol på ett adekvat sätt.
Renat RNA bryts ned
Kvaliteten på det renade RNA:t är relaterat till faktorer som bevarandet av provet, RNas-kontamination och manipulation, etc.
1. Vävnadsprover hålls inte i tid.
Rekommendation: Om vävnadsprover eller celler inte används i tid efter insamling, kryokonservera omedelbart vid -80 °C eller flytande kväve.För att extrahera RNA, använd ett nytaget vävnads- eller cellprov när det är möjligt.
2. Upprepad frys-upptining av vävnadsprover.
Rekommendation: När du lagrar vävnadsprover är det bäst att skära dem i små bitar för konservering och ta bort en av bitarna när du använder dem för att undvika upprepad frys-tinning av provet och nedbrytning av RNA.
3. RNase införs eller inte bär engångshandskar, masker etc. under operationen.
Rekommendation: RNA-extraktionsexperiment utförs bäst i separata RNA-manipulationsrum och bordet rensas före experimentet.
Bär engångshandskar och -masker under experimentet för att minimera RNA-nedbrytning orsakad av införandet av RNase.
4. Reagenser är kontaminerade med RNas under användning.
Rekommendation: Ersätt med ett nytt Animal Total RNA Isolation Kit för relaterade experiment.
5. Centrifugerören, spetsarna etc. som används vid RNA-manipulation är kontaminerade med RNas.
Rekommendation: Bekräfta att de centrifugrör, spetsar, pipetter etc. som används vid RNA-extraktion alla är RNas-fria.
Renat erhållet RNA påverkar experiment nedströms
RNA renat av reningskolonnen, om saltjonerna, proteinhalten är för stor kommer att påverka nedströmsexperimentet, såsom: omvänd transkription, Northern Blot et al.
1. Det eluerade RNA:t har saltjonrester.
Rekommendation: Bekräfta att rätt volym etanol har tillsatts till buffert RW2 och utför två reningskolonntvättar vid den centrifugalhastighet som anges för drift;om det finns någon saltjonrester, lämna reningskolonnen till buffert RW2 i 5 minuter vid rumstemperatur och utför centrifugering för att maximera avlägsnandet av saltkontamination.
2. Etanolrest i eluerat RNA.
Rekommendation: Bekräfta att efter tvättning av buffert RW2, utför tomrörscentrifugeringen vid den centrifugeringshastighet som anges för drift, öka tiden för tomrörscentrifugeringen till 2 minuter om det fortfarande finns etanolrester, eller låt den stå i rumstemperatur i 5 minuter efter tomrörscentrifugeringen för att maximera avlägsnandet av etanolrester.
