Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-stegs qRT-PCR Kit Sond
Beskrivningar
Denna produkt använder ett unikt lyseringsbuffertsystem för att snabbt frigöra RNA från odlade cellprover för RT-qPCR-reaktioner, vilket eliminerar den tidskrävande och mödosamma RNA-reningen, och bara 7 minuter för att erhålla den erforderliga RNA-mallen, med 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman som tillhandahålls av kitet kan snabbt och effektivt erhålla PCR-resultat i realtid.
5× Direct RT Mix och 2× Direct qPCR Mix-Taqman har stark inhibitortolerans och kan utföra effektiv reversering och specifik amplifiering med hjälp av lysatet från provet som ska mätas som en mall.Reagenset innehåller Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA-polymeras, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer och Stabilizer, som kan användas med lysbuffert för att snabbt och enkelt upptäcka prover, och har egenskaperna hög känslighet, specificitet och stabilitet.
Specifikationer
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kitkomponenter
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kitkomponenter 20μl qPCR-reaktionssystem | DRT-01021 | DRT-01022 | Notera | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Del I | Buffert CL | 4 ml | 20 ml | Celllys |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffert ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Del II | DNA Eraser | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX referensfärg | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Instruktionsmanual | 1 del | 1 del | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman kan köpas separat
Egenskaper & fördelar
■Enkelt och effektivt: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prov erhållas på bara 7 minuter.
■ Provbehovet är litet, så lite som 10 celler kan testas.
■ Hög genomströmning: den kan snabbt detektera RNA i celler odlade i 384, 96, 24, 12, 6-brunnars plattor.
■ DNA Eraser kan snabbt ta bort frigjorda genom, avsevärt minska påverkan på efterföljande experimentella resultat.
■ Optimerat RT- och qPCR-system gör tvåstegs RT-PCR omvänd transkription mer effektiv och PCR mer specifik och mer resistent mot RT-qPCR-reaktionshämmare.
Kitapplikation
Användningsområde: odlade celler.
- RNA frisatt genom provlys: endast tillämpligt på RT-qPCR-mallen i detta kit.
- Satsen kan användas för följande ändamål: genuttrycksanalys, verifiering av siRNA-medierad gentystnadseffekt, läkemedelsscreening, etc.
Lagring och hållbarhet
Del I av detta kit bör förvaras vid 4℃;Del II bör förvaras vid -20 ℃.
Foregene Protease Plus II bör förvaras vid 4℃, frys inte vid -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman bör förvaras vid -20℃i mörkret;om den används ofta kan den också förvaras vid 4℃ för korttidsförvaring (använd inom 10 dagar).
Real Time PCR primer designprinciper
Forward Primer och Reverse Primer
För realtids-PCR är primerdesign mycket viktigt.Primers är relaterade till specificiteten och effektiviteten av PCR-amplifiering och kan utformas med hänvisning till följande principer:
- Primerlängd: 18-30bp.
- GC-halt: 40-60%.
- Tm-värde: Primerdesignprogramvara, såsom Primer 5, kan ge primerns Tm-värde.Tm-värdena för uppströms och nedströms primers bör vara så nära som möjligt.Tm-beräkningsformeln kan också användas: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).När PCR utförs väljs i allmänhet en temperatur under primerns Tm-värde på 5 °C som glödgningstemperatur (motsvarande ökning av glödgningstemperaturen kan öka specificiteten för PCR-reaktionen).
- Primers och PCR-produkter:
- Designprimer PCR-amplifieringsproduktens längd är företrädesvis 100-150 bp.
- Designprimers i mallens sekundära strukturella område bör undvikas så mycket som möjligt.
- Undvik bildandet av 2 eller flera komplementära baser mellan 3'-ändarna av uppströms och nedströms primers.
- Primer 3′ terminalbas kan inte finnas med ytterligare 3 på varandra följande G eller C.
- Själva primrarna kan inte ha komplementära strukturer, annars kommer en hårnålsstruktur att bildas, vilket påverkar PCR-amplifieringen.
- ATCG bör fördelas så jämnt som möjligt i primersekvensen, och den 3′-terminala basen bör undvikas som T.
Bilaga1:Cell direktRT-qPCR Kit komponentt tilläggspaket
1. Celllyslösning
| Celllyslösning | |||
| Kitkomponenter (24-brunnars lyssystem / brunn) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deljag | Buffert CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffert ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DelII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kitkomponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-blandning | ||
| Kitkomponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referensfärg | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruktionsmanualer:
