(96-brunnars) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Beskrivningar
De(96-brunn) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Grön Itillhandahållerett unikt lyseringsbuffertsystemto släpper snabbt RNAfrån odlad cellprover för RT-qPCR-reaktioner, vilket eliminerar det tidskrävande och mödosammaRNA-reningsprocess och tar bara 7 minuter att erhålla den nödvändiga RNA-mallen.De5× Direct RT Mixoch2× Direct qPCR Mix-SYBRtillhandahålls i lådan kan snabbt ocheffektivt få kvantitativa i realtidPCR-resultat.
5× Direct RT Mix och 2× Direct qPCR Mix-SYBR har stark inhibitortolerans och kan använda lysatet från provet som ska testas som en mall för effektiv omvänd transkription och specifik amplifiering.Reagenset innehåller Foregene unikt omvänt transkriptas med hög affinitet för RNA, såväl som Hot D-Taq DNA-polymeras, dNTPs, MgCl2 , reaktionsbuffert, PCR-optimerare och stabilisator, och kan användas tillsammans med lysbufferten för att detektera provet snabbt, enkelt och exakt, och det har egenskaperna hög känslighet, stark specificitet och god stabilitet.
Satsen är inriktad på mikrosystemlys av odlade celler med 96 brunnar och har god enhetlighet och konsistens;kitets komponenter ger 96 lysreaktioner, 96 omvänd transkriptionsreaktioner och 96×2 qPCR-reaktioner, som kan möta 96-brunnars cellplatta för engångsanvändning, vilket undviker föroreningar som orsakas av upprepad öppning, frysning och upptining av reagenser och försämring av reagensprestanda.
Kitkomponenter
| Kit sammansättning ( 50 μL lyseringssystem/20 μLRT reaktionssystem /20μL qPCR reaktionssystem) | DRT-03011 | Anmärkning | |
| 96T | |||
| DelI | BuffertCL | 5 ml | CellLysis |
| FöregeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BuffertST | 500 μL | ||
| Del II | DNASuddgummi | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX referensfärg | 400µL | ||
| RNase- FriddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mårligen | 1 bit | 1 portion | |
*: Lysreagenset DNA Eraser ingår i del II av satsen;Cell Lysis, RT och qPCR komponenter kan köpas separat.
Egenskaper & fördelar
■Enkelt och effektivt: med Cell Direct RT-teknologi kan RNA-prov erhållas på bara 7 minuter.
■ Provbehovet är litet, så lite som 10 celler kan testas.
■ Hög genomströmning: den kan snabbt detektera RNA i celler odlade i 384, 96, 24, 12, 6-brunnars plattor.
■ DNA Eraser kan snabbt ta bort frigjorda genom, avsevärt minska påverkan på efterföljande experimentella resultat.
■ Optimerat RT- och qPCR-system gör tvåstegs RT-PCR omvänd transkription mer effektiv och PCR mer specifik och mer resistent mot RT-qPCR-reaktionshämmare.
Kitapplikation
Användningsområde: odlade celler.
- RNA frisatt genom provlys: endast tillämpligt på RT-qPCR-mallen i detta kit.
- Satsen kan användas för följande ändamål: genuttrycksanalys, verifiering av siRNA-medierad gentystnadseffekt, läkemedelsscreening, etc.
Lagring och hållbarhet
Del I av detta kit bör förvaras vid 4℃;Del II bör förvaras vid -20 ℃.
Foregene Protease Plus II bör förvaras vid 4℃, frys inte vid -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman bör förvaras vid -20℃i mörkret;om den används ofta kan den också förvaras vid 4℃ för korttidsförvaring (använd inom 10 dagar).
Real Time PCR primer designprinciper
Forward Primer och Reverse Primer
För realtids-PCR är primerdesign mycket viktigt.Primers är relaterade till specificiteten och effektiviteten av PCR-amplifiering och kan utformas med hänvisning till följande principer:
- Primerlängd: 18-30bp.
- GC-halt: 40-60%.
- Tm-värde: Primerdesignprogramvara, såsom Primer 5, kan ge primerns Tm-värde.Tm-värdena för uppströms och nedströms primers bör vara så nära som möjligt.Tm-beräkningsformeln kan också användas: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).När PCR utförs väljs i allmänhet en temperatur under primerns Tm-värde på 5 °C som glödgningstemperatur (motsvarande ökning av glödgningstemperaturen kan öka specificiteten för PCR-reaktionen).
- Primers och PCR-produkter:
- Designprimer PCR-amplifieringsproduktens längd är företrädesvis 100-150 bp.
- Designprimers i mallens sekundära strukturella område bör undvikas så mycket som möjligt.
- Undvik bildandet av 2 eller flera komplementära baser mellan 3'-ändarna av uppströms och nedströms primers.
- Primer 3′ terminalbas kan inte finnas med ytterligare 3 på varandra följande G eller C.
- Själva primrarna kan inte ha komplementära strukturer, annars kommer en hårnålsstruktur att bildas, vilket påverkar PCR-amplifieringen.
- ATCG bör fördelas så jämnt som möjligt i primersekvensen, och den 3′-terminala basen bör undvikas som T.
Bilaga1:Cell direktRT-qPCR Kit komponentt tilläggspaket
1. Celllyslösning
| Celllyslösning | |||
| Kitkomponenter (24-brunnars lyssystem / brunn) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deljag | Buffert CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffert ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DelII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kitkomponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-blandning | ||
| Kitkomponenter (20 μl reaktionssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referensfärg | 40 μl | 200 μl |
| RNase-fri ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruktionsmanualer:
