Det låga förhållandet mellan A260/A230 orsakas vanligtvis av föroreningar med maximal absorptionsvåglängd vid 230 nm.Låt oss se vad dessa föroreningar inkluderar:

• Vanliga föroreningar	Absorptionsvåglängd	Förhållande effekt
  Protein	~230nm och 280nm	Samtidig minskning av A260/A 280och A260/A 280förhållanden
  Guanidinsalt	220-240 nm	Minska A260/A 280förhållande
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm och 270nm	Minska A260/A 280förhållande
  EDTA	~230nm	Minska A260/A 280förhållande
  Etanol	230-240 nm	Minska A260/A 280förhållande

 
 
 
Absorptionsvåglängd och kontrastvärde för vanliga föroreningar

Proteinkontamination
Proteinföroreningar kan betraktas som den vanligaste föroreningen i nukleinsyraextraktionsprocessen.Protein finns mellan den övre vattenfasen och den nedreorganiskfas.Föroreningar kommer att minska förhållandet A260/A280 och A260/A230 samtidigt, och förhållandet A260/A230 kommer att förändras tydligare än förhållandet A260/A280.
Under efterföljandeomvänd transkriptionor qPCR-reaktioner, proteinrester kan hämma eller störa enzymfunktionen.Det bästa sättet att undvika proteinkontamination är att tänka på principen om "snarare mindre än mer, en liten mängd många gånger" när man aspirerar supernatanten.

2. Guanidiniumförorening
hydroklorid (GuHCl) och guanidintiocyanat (GTC) har effekten av att denaturera proteiner, vilket snabbt kan förstöra cellmembran under nukleinsyraextraktionsprocessen, vilket orsakar proteindenaturering och utfällning.Absorptionsvåglängden för GuHCl och GTC är mellan 220-240 nm, ochkvarvarande guanidiniumsalt kommer att minska förhållandet A260/A230.Även om det kvarvarande guanidiniumsaltet kommer att minska förhållandet,påverkan på experiment nedströms är faktiskt försumbar.

3. Trizolförorening
Huvudkomponenten i Trizol är fenol.Fenols huvudsakliga funktion är att lysera celler och frigöra proteiner och nukleinsyraämnen i celler.Även om fenol effektivt kan denaturera proteiner, kan det inte helt hämma RNas-aktivitet.Därför tillsätts 8-hydroxikinolin, guanidin isotiocyanat, β-merkaptoetanol, etc. till TRIzol för att hämma endogent och exogent RNas.
När man extraherar cellulärt RNA kan Trizol snabbt lysera cellerna och hämma nukleaset som frigörs från cellerna, och kvarvarande Trizol kommer att avsevärt minska förhållandet A260/A230.
Bearbetningsmetod: Vid centrifugering måste det noteras att fenolen i Trizol är lättlöslig i vattenfasen vid 4° och rumstemperatur.

4. Etanolåterstod
Etanol används i den slutliga processen för att fälla ut DNA:t samtidigt som man löser upp saltjoner som kan vara bundna till DNA:t.Absorptionsvåglängden för den högstaabsorptionstopp avetanol är också vid 230-240 nm, vilketkommer också att minska förhållandet A260/A230.
Metoden för att undvika etanolrester kan upprepas två gånger under den slutliga elueringen, genom att blåsa indragskåpi två minuter för att tillåta etanolen att helt avdunsta innan buffert tillsätts för eluering.
Det bör dock vara känt att förhållandet endast är ett utvärderingsindex för RNA-kvalitet.Om de ovan nämnda operationerna är strikt reglerade kommer avvikelsen mellan förhållandet och standardintervallet inte att ha någon större inverkan på försök nedströms.
Relaterade produkter:
Animal Total RNA-isoleringskit
Plant Total RNA-isoleringskit
Cell Total RNA-isoleringskit
Plant Total RNA Isolation kit Plus