Hur mycket du vet

Om Nukleinsyraextraktion

Början och slutet av renad nukleinsyra

Allt är svårt i början, renad nukleinsyra är mest

Initiering av molekylära experiment, för efterföljande experiment

Framgång eller misslyckande har en avgörande inverkan.

Spår/ultraspår UV-spektrofotometer gynnas av många vetenskapliga forskare eftersom den enkelt, snabbt och ekonomiskt kan upptäcka nukleinsyrakoncentration och protein- och saltjonrester.

Som vi alla vet betyder A260 nukleinsyraabsorbans OD-värde, A280 betyder proteinkoncentration absorbans OD-värde, A230 betyder saltjonkoncentration absorbans OD-värde, så A260 kan omvandla nukleinsyrakoncentration, A260/280 betyder proteinrest, A260/230 betyder saltjonrester, men det här är bara en regel som forskare har upptäckt på ett, och det är bara en regel som upptäcks av en regel.konventionell” att tro att det kan förklara renheten av DNA och RNA tillen viss utsträckning.Det är inte den enda standarden för identifiering av nukleinsyrautbyte och renhet, den används bara som en referens och det är inte en "guldstandard".

Thermo Fisher ND-2000 manualen betonar tillförlitligheten hos testresultaten

Anledningen är att de resultat som erhålls genom att använda en mikro/ultramikro UV-spektrofotometer endast återspeglar utbytet och renheten av nukleinsyra från sidan, och det finns många påverkande faktorer (optisk väg, provvolym, provkoncentration, pH-värde, andra joner som påverkar absorbansmätning, etc.), det uppmätta OD-värdet är inte nödvändigtvis korrekt.Samtidigt, på grund av bristen på specificitet hos materialet för bestämning av absorbansvärde, har enkelsträngat DNA, dubbelsträngat DNA, RNA, dNTPs och vissa proteiner alla absorptionstoppar vid 260 nm våglängd, och koncentrationen som bestäms av A260 enbart är inte nödvändigtvis det verkliga DNA eller RNA.Koncentration och dess integritet och nedbrytning kan inte bedömas.

Så hur ska man bedöma kvaliteten på vår renade nukleinsyra?Förutom att använda en mikro/ultramikro UV-spektrofotometer för detektion, krävs även metoder som agarosgelelektrofores för att visuellt visa nukleinsyrans renhet och integritet och för att indikera koncentrationen i viss utsträckning.På detta sätt är nukleinsyrautbytet och renheten som erhålls från detekteringsresultaten av olika metoder trovärdiga.

Experimentell diagramjämförelse

Genomiskt DNA från H1299-celler extraherades med hjälp av företag A:s DNA Extraction-kit, och betydande föroreningar sågs, vilket resulterade i höga OD-värden

(OD-mätvärde och motsvarande elektroferogram)

Utvärderingsindex

Finns det en "guldstandard" för nukleinsyrautbyte och kvalitetstestning?

Så vitt vi vet finns det ingen enkel, snabb och billig metod.Oavsett om det är spektrofotometer, gelelektrofores eller masspektrometri, reflekterar de alla koncentrationen och renheten av nukleinsyra i lösningen ur olika aspekter, och de måste bedömas genom att hänvisa till varandra.

Det bästa utvärderingsindexet är alltidden uppföljande experimentella ansökan.Det påverkar inte effektiviteten av omvänd transkription och PCR-amplifiering.Att erhålla tillförlitliga amplifieringsprodukter och Ct-värden och erhålla en fullständig sekvens genom sekvensering är framgångsrik nukleinsyraextraktion.

Sammanfattningsvis bör synen på teorin om endast ratio utmanas av synen på att "använda bra nedströms experimentella resultat som bra extraktionsparametrar"!

Rekommenderade Foregene DNA RNA-extraktionssatser för att få hög DNA/RNA-renhet:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/