Leda

Långt icke-kodande RNA, lncRNA är ett icke-kodande RNA med en längd som är större än 200 nukleotider, vanligtvis mellan 200-100000 nt.lncRNA reglerar genuttryck på epigenetiska, transkriptions- och post-transkriptionella nivåer, och deltar i X-kromosomtystnad, genomprägling och kromatinmodifiering, transkriptionsaktivering, transkriptionsinterferens, nukleär transport, cellcykelreglering, celldifferentieringsreglering och doskompensationseffekter för att förebygga många andra viktiga kompensationseffekter (Dosering och kompensationseffekter) ion av mänskliga sjukdomar, och är för närvarande en av hot spots inom biomedicinområdet.

01  Typer och egenskaper hos LncRNA

lncRNA delas in i många typer beroende på de olika källorna till dess bildande, som visas i figuren ovan.Har följande egenskaper:

1. lncRNA är vanligtvis längre, med dynamiskt uttryck och olika splitsningsmetoder under differentiering
2. Jämfört med kodande gener har lncRNA vanligtvis en lägre uttrycksnivå
3. De flesta lncRNA har uppenbar temporal och rumslig uttrycksspecificitet i processen för vävnadsdifferentiering och utveckling
4. Det finns karakteristiska uttryck i tumörer och andra sjukdomar
5. De subcellulära placeringarna av lncRNA är olika
6. Sekvensen är låg i bevarande, men funktionen har en viss grad av bevarande osv.

02 Vanliga frågor om LncRNA omvänd transkription

På grund av det låga innehållet av lncRNA i celler, lång längd och struktur på hög nivå har sådant RNA ofta komplexa strukturer som stamslingor eller hårnålar, och RT-qPCR är benäget att få problem med misslyckad omvänd transkription eller låg effektivitet.

03 LncRNA omvänd transkriptionslösning

I den centrala regeln kallas processen för RNA-virus som använder sitt eget omvända transkriptas för att syntetisera DNA med RNA som mall omvänd transkription.Processen att använda RNA-virus omvänt transkriptas för att syntetisera cDNA-mall in vitro kallas omvänd transkription.Huvudelementen som ingår i det omvända transkriptionssystemet: RNA-mall, omvänt transkriptas, primers och andra komponenter.

1.RNA-mall

Inverkan av RNA-mall på omvänd transkription återspeglas i dess struktur, renhet och integritet.Ju högre renhet och integritet av det extraherade RNA:t, desto högre effektivitet för omvänd transkription och desto mer exakta blir de efterföljande kvantitativa resultaten.Det RNA som renats med vanliga RNA-extraktionsreagenser innehåller ofta rester av alkohol och guanidinsalter, som har en starkt hämmande effekt på de flesta omvända transkriptaser.

2. Omvänt transkriptas

Omvänt transkriptas har ett nyckelinflytande i hela systemet för omvänd transkription.Den lämpliga temperaturen för det omvända transkriptaset som används i de flesta laboratorier är i allmänhet 42°C.I själva verket kräver öppningen av RNA-strukturen på hög nivå en högre temperatur, och kraven för det omvända transkriptaset är högre.

3.Primer

Omvänd transkriptionsprimrar inkluderar genspecifika primrar, slumpmässiga primrar och Oligo dT-primrar.De flesta lncRNA innehåller inte polyA-svansar, och det är viktigt att korrekt matcha de slumpmässiga primrarna med Oligo dT.

4.Övriga komponenter

Med tanke på det faktum att RNA är särskilt lätt att bryta ned, kan införandet av komponenter i det omvända transkriptionssystemet minimeras, vilket effektivt kan förhindra inträngning av RNas och säkerställa en smidig utveckling av omvänd transkription.

Foregeneerhåller från RNA-mall, omvänd transkription till qPCR

Eskortera din lncRNA-detektering omfattande

Djur totalt RNA IsolationKit (med kolumn för borttagning av gDNA)

Cell totalt RNA IsolationKit (med kolumn för borttagning av gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Med gDNas)(Super Premix för första-strängs cDNA-syntes från lncRNA)

Realtids PCR EasyTM-SYBR Grön I

Afördelar ofRNA-extraktion:

Satsen använder tredje generationens RNA-extraktionsteknologi, inget behov av att använda DNase.

11 minuter från odlade celler med 96, 24, 12 och 6-brunnars plattor, högeffektiv extraktion av gDNA-fri, hög renhet och högkvalitativt totalt cell-RNA.

Fördelar med lncRNA omvänd transkription:

Ett omvänd transkriptionssystem speciellt utvecklat för LncRNA för att snabbt ta bort genomisk DNA-kontamination.

Det omvända transkriptionssystemet har hög termisk stabilitet och har fortfarande bra omvänd transkriptionsprestanda vid 50°C.

Mallar med högt GC-innehåll och komplex sekundär struktur kan vändas med hög effektivitet.

Fördelarof qPCR:

Hotstart Foregene Taq Polymerase har högre amplifieringseffektivitet, högre amplifieringskänslighet och högre amplifieringsspecificitet

Den optimerade Real PCR Easy Mix gör att SYBR Green I har högre detektionskänslighet och dess fluorescensintensitet är 3-5 gånger högre än liknande produkter, vilket kan möta behoven för olika typer av kvantitativa fluorescensexperiment.