Guide för problemanalys

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Lågt utbyte eller inget DNA

Det finns vanligtvis många faktorer som påverkar utbytet av genomiskt DNA, inklusive provkällan, provets ålder, provets lagringsförhållanden och operationen.

Genomiskt DNA kunde inte erhållas under extraktion

1. Vävnadsproverna lagras felaktigt eller lagras för länge, vilket resulterar i nedbrytning av det genomiska DNA:t.

Rekommendation: Förvara vävnadsprover i flytande kväve eller -20°C;försök att använda nyinsamlade prover för genomisk DNA-extraktion.

2. För liten provmängd kan göra att motsvarande genomiska DNA inte extraheras.

Förslag: För vävnadsprover som har lagrats under lång tid eller som har allvarlig genomisk DNA-nedbrytning kan mängden vävnadsprover på lämpligt sätt ökas för att extrahera betydande genomiskt DNA.Mängden av provet kan bestämmas enligt DNA-behovet, men det färska provet bör inte överstiga 100 mg och det torra provet bör inte överstiga 30 mg.

3. Provet mals inte med flytande kväve eller placeras för länge efter flytande kväve.

Förslag: Under DNA-extraktion måste provet malas helt med flytande kväve för att bryta cellväggen;efter malning, överför provpulvret till PL1 förvärmd till 65°C så snart som möjligt (när det malda pulvret har smält, kommer det genomiska DNA:t att börja brytas ned snabbt).

4. Felaktig förvaring av Foregene Protease resulterar i minskad eller inaktiverad aktivitet.

Rekommendation: Bekräfta lagringsförhållandena för Foregene Protease eller ersätt det med ett nytt Foregene Protease för enzymatisk hydrolys.

5. Satsen förvaras felaktigt eller förvaras för länge, vilket gör att vissa komponenter i satsen misslyckas.

Rekommendation: Köp ett nytt växtgenomiskt DNA-extraktionskit för relaterade operationer.

6. Felaktig användning av satsen.

Förslag: Köp ett växt-DNA-isoleringskit dedikerat till prover för extraktion och rening av växtgenomiskt DNA.

7. Buffer WB utan att lägga till envattenfri etanol.

Rekommendation: Se till att tillsätta rätt volym absolut etanol till buffert WB.

8. Eluenten droppades inte på kiseldioxidmembranet korrekt.

Förslag: Tillsätt den förvärmda eluenten vid 65°C℃droppvis till mitten av silikagelmembranet och låt det stå i rumstemperatur i 5 minuter för att öka elueringseffektiviteten.

Extraktion för att erhålla lågavkastande genomiskt DNA

1. Provet lagras felaktigt eller lagras för länge, vilket resulterar i nedbrytning av genomiskt DNA.

Rekommendation: Förvara vävnadsprover vid -20℃;försök att använda nyinsamlade vävnadsprover för genomisk DNA-extraktion.

2. Om mängden vävnadsprover är för liten blir det extraherade genomiska DNA:t mindre.

Förslag: Vissa växtprover är rika på vatten, som vattenväxter som alger etc., doseringen kan höjas på lämpligt sätt eller så kan vattnet torkas ut lite innan operationen.

3. Proverna maldes inte ordentligt med flytande kväve eller fick stå i rumstemperatur för länge efter malning.

Förslag: Malningen av flytande kväve måste vara tillräcklig och provets cellvägg bör brytas så mycket som möjligt;omedelbart efter malningen ska provpulvret överföras till 65℃förvärmd buffert PL1 för nästa steg.

4. Använder inte rätt sats.

Rekommendation: Använd ett dedikerat växt-DNA-isoleringskit för att extrahera och rena växtgenomiskt DNA.

5. Felaktig förvaring av Foregene Protease resulterar i minskad eller inaktiverad aktivitet.

Rekommendation: Bekräfta lagringsförhållandena för Foregene Protease eller ersätt det med ett nytt Foregene Protease för enzymatisk hydrolys.

6. Elueringsproblem

Rekommendation: Använd Buffer EB för eluering;om du använder ddH₂O eller andra elueringsmedel, se till att eluentens pH är mellan 7,0-8,5.

7. Eluenten har inte droppats korrekt

Förslag: Lägg till elueringsdroppen i mitten av kiseldioxidmembranet och låt den stå i rumstemperatur i 5 minuter för att öka elueringseffektiviteten.

8. Elueringsvolymen är för liten

Förslag: Använd eluenten för genomisk DNA-eluering enligt instruktionerna, åtminstone inte mindre än 100μl.

Extraherat genomiskt DNA med låg renhet

Den låga renheten hos genomiskt DNA kommer att leda till misslyckande eller dålig effekt av nedströmsexperiment, såsom: enzymet kan inte skäras och målgenfragmentet kan inte erhållas med PCR.

1. Diverse proteinkontamination, RNA-kontamination.

Analys: Buffert PW användes inte för att tvätta kolonnen;Buffert PW användes inte för att tvätta kolonnen med rätt centrifugeringshastighet.

Förslag: försök att säkerställa att det inte finns någon utfällning i supernatanten när supernatanten passerar genom kolonnen;se till att tvätta reningskolonnen med Buffer PW enligt instruktionerna, och detta steg kan inte utelämnas.

2. Orenhet jonförorening.

Analys: Buffer WB tvättkolonnen uteslöts eller tvättades endast en gång, vilket resulterade i kvarvarande jonkontamination.

Rekommendation: Se till att tvätta två gånger med Buffer WB enligt instruktionerna för att ta bort kvarvarande joner så mycket som möjligt.

3. RNas-kontamination.

Analys: Exogent RNas tillsätts till bufferten;felaktig tvättoperation i buffert PW kommer att resultera i kvarvarande RNas och påverka nedströms RNA experimentella operationer, såsom in vitro transkription.

Förslag: Nukleinsyraextraktionssatser i Foregene-serien kan ta bort RNA utan ytterligare RNas, och alla reagenser i Plant DNA Isolation Kit behöver inte RNas;se till att tvätta reningskolonnen med Buffer PW enligt instruktionerna, och detta steg kan inte utelämnas.

4. Etanolrester.

Analys: Efter tvättning av reningskolonnen med buffert WB utfördes ingen centrifugering med tomt rör.

Rekommendation: Följ instruktionerna för korrekt centrifugering av tomma rör.

Bruksanvisning:

Instruktionsmanual för Plant DNA Isolation Kit