PCR-metoder och nukleinsyraaerosolkontamination i nukleinsyratestlaboratorier är som två sidor av ett mynt.Vi kan bara välja att ha det eller inte, men vi kan inte välja om vi vill ha det eller spendera det.

1. Screening av DNA-borttagare

För att uppnå rumsligt avlägsnande av nukleinsyra-aerosolkontamination är det först nödvändigt att sålla bort DNA-borttagare som kan ta bort nukleinsyror i flytande tillstånd.För det finns inte många DNA-borttagare som verkligen fungerar.För den experimentella metoden, se: DNA-borttagare kan inte vara ett "hemligt hörn" av laboratoriet!

I detta experiment blandades 100 kopior/μL (CT ungefär 31) av ASFV-plasmid och DNA-borttagare kvantifierade med digital PCR i lika volymer och reagerade sedan vid rumstemperatur i 10 minuter, 20 minuter respektive 30 minuter.Efter nukleinsyraextraktion utfördes qPCR-amplifiering.En positiv kontroll blandad med plasmid och vatten jämfördes.Eftersom experimentet inte avslutades samtidigt kan det finnas en viss avvikelse mellan resultaten, men det påverkar inte slutsatsen av experimentet.Hittills har jag utvärderat 10 kommersiella produkter för DNA-borttagning.Endast produkter nr. 1, nr. 6 och nr. 8 kan effektivt bryta ned plasmid-DNA i flytande tillstånd.Andra produkter har nästan ingen effekt.

Tabell 1 Effekt av nukleinsyraborttagning av kommersiellt tillgänglig DNA-borttagare

2. Experimentet med DNA-borttagningseffekt av vanliga desinfektionsmedel

1. Sållning av vanliga desinfektionsmedel

Det finns många typer av desinfektionsmedel som vanligtvis används i laboratorier: aldehyder, fenoler, alkoholer, kvartära ammoniumsalter, peroxider, klorpreparat samt syror och baser.Desinfektionseffekterna av dessa desinfektionsmedel på mikroorganismer har till fullo verifierats genom experiment, men det finns inga tillräckliga experimentella data om nukleinsyrors nedbrytningseffekt.Nukleinsyratestlaboratorier behöver ett desinfektionsmedel som inte bara har en bra desinfektionseffekt på mikroorganismer, utan också kan bryta ner DNA.Testresultaten visar att endast två klorpreparat av 84 desinfektionsmedel och triklorisocyanursyra och 1 M saltsyra uppfyller kraven.Eftersom 1 M saltsyra är mycket frätande, rekommenderas att klorpreparat används som avfallshantering i nukleinsyratestlaboratorier.Klorpreparat är dock frätande för metaller och kan inte användas för desinfektion av instrument och utrustning.

Tabell 2 DNA-borttagande effekter av olika typer av desinfektionsmedel

2. Minsta effektiva koncentration av klorpreparat

Klorbaserade desinfektionsmedel har en stark DNA-nedbrytningseffekt, men på grund av deras metallfrätande och irriterande egenskaper kan de användas för att rengöra golv, icke-metalliska bänkskivor, blötläggningsspetsar, centrifugrör och andra testartiklar.

Enligt "New Coronary Pneumonia Epidemic Disinfection Technical Guidelines": Föroreningar (patienters blod, sekret och kräk) tillgängligt klor 5g/L-10g/L klorinnehållande desinfektionsmedel;golv, väggar och föremålsytor använder tillgängligt klor 1g/L Klordesinfektionsmedel: kläder, sängkläder och andra textilier blötläggs först i klordesinfektionsmedel med 0,5g/L tillgängligt klor i 30 minuter och rengörs sedan som vanligt.

Tabell 3 DNA-borttagande effekt av olika koncentrationer av klordesinfektionsmedel

Testresultaten visar att: när den effektiva klorkoncentrationen är större än eller lika med 1,2 g/L, kan det klorhaltiga desinfektionsmedlet fullständigt bryta ned 100 kopior/μL plasmid när det används i 5 minuter.Vid verkan i 10 minuter kan 84-desinfektionsmedel med en effektiv klorkoncentration större än eller lika med 0,6 g/L bryta ner 100 kopior/μL av plasmider fullständigt.

3. Luftborttagningsexperiment förorenat av nukleinsyraaerosol

Hur städar man upp luften som är förorenad av nukleinsyraaerosoler?De flesta av tankarna är att skapa en aerosolförorenad miljö och sedan städa upp den, eller att rensa upp nukleinsyror efter kontaminering.För mig är ett experiment som inte kan upprepas och resultatet av experimentet inte kan analyseras kvantitativt meningslöst, så jag lånade några metoder för desinficerande luftdesinfektion.Se "GB27948-2020 Allmänna krav för luftdesinfektionsmedel" och "Tekniska specifikationer för desinfektion"

1. Testmaterial

1.1 DNA-borttagare: I detta experiment valdes två kommersiellt tillgängliga DNA-borttagare 6 och 8 i tabell 1.

1.2 Testplasmid: Med tanke på att CT-värdet för de flesta laboratorieföroreningar kommer att vara högre än 30, är ​​koncentrationen av ASFV-genplasmiden som används denna gång cirka 100 kopior/μL, och den fluorescerande kvantitativa PCR-CT är cirka 31,07.Tillsätt plasmiden till den flockande bomullspinnen och lufttorka.

1.3 Testinstrument: Bilingkehan KVBOX-desinfektionsinstrumentet, som stöds av Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., har utmärkt luftdesinfektionsprestanda med väteperoxiddesinfektionsmedel och kan effektivt döda sporer och andra mikroorganismer.

1.4 Testutrymme: ett stängt transferfönster på cirka 0,1 kubikmeter.

2. Testmetod

Mängden desinfektionsmedel som är inställd på desinfektionsmaskinen är 10 ml och koncentrationen är 100 ml/m3, vilket är mycket högre än "GB27948-2020 Allmänna krav för luftdesinfektionsmedel": vid användning av aerosolspraydesinfektion bör mängden desinfektionsmedel vara ≤10 ml/m3