Upprätta PCR-experiment-SOP för att standardisera experimentpersonalens beteende.
Försöksledaren följer strikt driftsprocedurerna och minimerar PCR-föroreningar som kan orsakas av mänskliga faktorer eller förhindrar uppkomsten av föroreningar.Dessutom bör försöksledaren ha motsvarande yrkeskunskaper och färdigheter, inklusive färdigheter i att använda relaterad utrustning, klargöra hela arbetsprocessen, behärska behandlingsmetoderna för kontaminering och laboratoriekvalitetskontrollmetoder och att kunna tolka testresultaten korrekt.
Upprätta ett standard PCR-laboratorium.
PCR-laboratoriet är i princip indelat i fyra områden, nämligen reagensberedningsområde, provbearbetningsområde, amplifieringsområde och amplifieringsproduktanalysområde.De två första områdena är förförstärkningsområden och de två sista områdena är områden efter förstärkning.Förförstärkningszonen och postförstärkningszonen bör vara strikt åtskilda.Experimentmaterial, reagenser, registreringspapper, pennor, rengöringsmaterial etc. kan bara flöda från förförstärkningsområdet till området efter förstärkningen, det vill säga från området för reagensberedning → provbearbetningsområdet → förstärkningsområdet → analysområdet för amplifieringsprodukten, och får inte rinna bakåt.Luftflödet i laboratoriet bör också flöda från förförstärkningsområdet till området efter förstärkningen, och inte strömma bakåt.Den idealiska PCR-laboratoriedesignen visas nedan:
Figur A: Idealiskt PCR-laboratorieinställningsläge med undertryck i buffertrummet
Figur B: Idealiskt PCR-laboratorieinställningsläge med positivt tryck i buffertrummet
PCR-laboratorieinställningsdiagrammen som ges i figur A och figur B bör vara ett mer idealiskt inställningsläge, och laboratoriet med villkor kan hänvisa till detta läge för design.För vanliga laboratorier rekommenderas att PCR-förstärkningsområdet och produktanalysområdet kan separeras, och öppningen av locket bör minskas så mycket som möjligt i provberedningsområdet och PCR-förstärkningsområdet.Kom ihåg: Produkter och experimentella förnödenheter inom produktanalysområdet är strängt förbjudna att föras till provberedningsområdet och PCR-förstärkningsområdet.
Om laboratoriet endast utför PCR-detektion och identifiering, rekommenderas att använda fluorescerande kvantitativ PCR istället för konventionell PCR.
Fluorescenskvantitativa PCR-detektionsresultat kan samlas in och analyseras med fluorescenssignaler, så det finns inget behov av att öppna locket för elektrofores efter reaktionen, vilket undviker PCR-produktkontamination orsakad av läckage av reaktionsprodukter för att bilda aerosoler.Om du ökar antalet locköppningar under laddningssteget av gelelektrofores, kommer aerosolförorening sannolikt att inträffa.Det rekommenderas att främja tillämpningen av kvantitativ PCR och gradvis ersätta kvalitativ PCR.
UNG anti-PCR-produktkontaminationssystem används för PCR-reaktionen.
Systemet använder dUTP istället för dTTP.Efter PCR-reaktionen inkorporeras alla PCR-produkter (DNA-fragment) med dUTP;i nästa omgång av PCR-reaktionen inkuberas UNG-enzymet som tillsätts till systemet vid 37°C i 5 minuter före PCR, vilket specifikt kan bryta ned alla DNA-fragment som innehåller dUTP, och sedan utföra PCR-reaktion.Detta kan helt ta bort aerosolkontaminationen som orsakas av PCR-produkter.Effekten visas i bilden nedan:
Obs: För direkt PCR-serien kan du välja serieprodukter från Foregenes anti-PCR-produktkontaminationssystemFöreslå
För laboratorier som utför storskaliga genotypningstester, rekommenderas det starkt att använda UNG anti-PCR-produktkontaminationssystem för att testa reagenser förutom att bygga rimliga laboratorier.
Påminnelse: Användningen av detta system kan inte ta bort PCR-produktkontaminationen som redan har orsakats.Därför bör UNG-systemet användas i början av det relevanta testet, och UNG-systemet bör användas för PCR-amplifiering, för att förhindra kontaminering av PCR-produkter Falskt positiva.
Det rekommenderas att använda Direct PCR-UNG-systemet från Foregene när du utför storskaliga tester, såsom:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Denna serie kit från Foregenekan inte bara utföra PCR-detektion snabbt och i stor skala, utan också effektivt förhindra och kontrollera PCR-produktkontamination.
Posttid: 19-mars 2021
