1: Byt ut de experimentella förråden i tid
Ställ in (NTC) negativ kontroll och upprepa det många gånger.När det upptäcks att det finns kontaminering av PCR-produkter i laboratoriet, byt ut alla experimentella förråd i tid.Såsom: späd om och förbered primrarna, omsterilisera pipettspetsen, EP-röret, ddH2O, etc., ersätt med en ny pipett och tillfälligt låna andra laboratorier för att utföra PCR-experiment.Det kontaminerade laboratoriet ska ventileras och bestrålas med ultravioletta strålar tills kontamineringen av PCR-produkten är eliminerad innan experimentet fortsätter.
2: Förläng UV-exponeringstiden
Det är värt att notera att för att ta bort DNA-kontamination bör vanlig ultraviolett strålning förlängas med 2 timmar än vanligt.Trots det är effekten av UV-bestrålning på att ta bort små fragment (under 200 bp) av DNA-kontamination fortfarande inte bra.
Ultraviolett våglängd (nm) är i allmänhet 254/300 nm, och det räcker för att bestråla i 30 minuter.Det bör noteras att när man väljer UV för att eliminera kontamineringen av kvarvarande PCR-produkter bör längden på PCR-produkten och fördelningen av baser i produktsekvensen beaktas.UV-bestrålning är endast effektiv för långa fragment över 500 bp och har liten effekt på korta fragment.
Under UV-bestrålning kommer pyrimidinbaserna i PCR-produkten att bilda dimerer.Dessa dimerer kan avsluta förlängningen, men inte alla pyrimidiner i DNA-kedjan kan bilda dimerer, och UV-bestrålning kan också bryta dimererna..Graden av dimerbildning beror på UV-våglängden, typen av pyrimidindimer och sekvensen av nukleotider intill dimerstället.Därför, om de PCR-amplifierade fragmenten är små, rekommenderas det att använda UNG anti-PCR-produktkontaminationssystem.
3: Vanligt använda DNA-föroreningsrenare
Aerosoler genereras lätt när pipetter tillsätts, vilket är svårt att undvika, och det sätter sig snabbt.Därför är det utan tvekan ett bra val att ofta använda speciella DNA-föroreningsrenare för att förhindra spridning av DNA-föroreningar.
4: Använd UNG anti-föroreningssystem
Efter att PCR-produktkontaminationen har tagits bort kan testlaboratoriet använda UNG anti-PCR-produktkontaminationssystem för att förhindra PCR-produktkontamination.I allmänna laboratorier kan du utföra enkla experimentella partitioner, strikt separera PCR-produktområdet från andra områden, upprätta vissa laboratorieregler och -föreskrifter och genomföra relevant utbildning för att förhindra uppkomsten av PCR-produktkontamination.
Rekommendationer: Att etablera ett rimligt PCR-laboratorium, upprätthålla en bra PCR-miljö, utarbeta standard-PCR-driftsprocedurer och odla den rigorösa driftmedvetenheten hos experimenterande är nycklarna till att förhindra eller minska föroreningen av PCR-experiment.
Posttid: 2021-aug-12