• Facebook
  • linkedin
  • Youtube

Den enastående egenskapen hos PCR-reaktionen är dess stora amplifieringskapacitet och extremt höga känslighet.För att förbättra PCR-prestandan och detektionseffektiviteten har vi åtagit oss att förbättra PCR-förstärkningskapaciteten och detektionskänsligheten, men huvudvärken är under försöket.Falska positiva resultat förekommer ofta, och en mycket liten mängd provkorskontaminering eller kontaminering av PCR-produkter kan orsaka falska positiva resultat i experimentet.

Fem typer av PCR-produktkontamination

Det finns många orsaker till PCR-kontamination, som grovt kan delas in i följande kategorier:

1. Korskontaminering mellan prover

1.1

Provkontamination orsakas huvudsakligen av kontaminering av behållaren för att samla in provet, eller när provet placeras läcker det ut ur behållaren på grund av lös försegling, eller provet fästs på utsidan av behållaren, vilket orsakar korskontamination;Kontaminering leder till kontaminering mellan prover;vissa mikrobiella prover, särskilt virus, kan spridas med aerosoler eller bilda aerosoler, vilket resulterar i ömsesidig kontaminering.

2. PCR-reagenskontamination

Det främsta skälet är att under beredningen av PCR-reagenser kontamineras provpistolen, behållaren, dubbeldestillerat vatten och andra lösningar av PCR-nukleinsyramallen.

1.2

3.Kloning av plasmidkontamination

1.3

I molekylärbiologiska laboratorier och vissa laboratorier som använder klonade plasmider som positiva kontroller är problemet med klonad plasmidkontamination också vanligt.Eftersom innehållet av kloningsplasmid i enhetsvolym är ganska högt, och fler verktyg och reagens behövs i reningsprocessen, och plasmiden i levande celler är mycket sannolikt förorenad på grund av den starka tillväxten och reproduktionsförmågan hos levande celler.

4.Kontaminering av förstärkta produkter

Kontamineringen av amplifierade produkter är det vanligaste kontamineringsproblemet vid PCR-reaktioner.Eftersom kopian av PCR-produkten är stor (vanligtvis 1013 kopior/ml), vilket är mycket högre än gränsen för antalet PCR-detekteringskopier, kan en mycket liten mängd PCR-produktkontamination orsaka falska positiva resultat.

1.4

5.Aerosolföroreningar

1.5

Aerosolföroreningar är den mest sannolika formen av kontaminering av PCR-produkter, och den är också den lättaste att förbise.Den bildas av friktionen mellan vätskeytan och luften.I allmänhet kan aerosolkontamination bildas när locket öppnas, när provet sugs upp eller till och med när reaktionsröret skakas kraftigt.Enligt beräkningar kan en aerosolpartikel innehålla 48 000 exemplar, så föroreningarna som orsakas av den är ett problem som förtjänar särskild uppmärksamhet.

I synnerhet använder testlaboratorier ofta samma primerpar för att testa en viss gen.Med tiden kommer en stor mängd PCR-produktkontamination att inträffa i laboratorieutrymmet.När en sådan kontaminering väl inträffar är det svårt att eliminera det på kort tid.

För de tre första typerna av föroreningar kan vi använda effektiva medel för att undvika, men föroreningarna som orsakas av PCR-produkter är svåra att förhindra, särskilt i byggandet av icke-standardiserade PCR-laboratorier.I PCR-processen, när pipettspetsen suger och blåser vätskan och PCR-rörets lock öppnas, kommer en aerosol att bildas.DNA-molekylerna som bärs av aerosolen (en aerosol kan bära tiotusentals DNA) är svåra att eliminera eftersom de flyter i luften.När nästa omgång av PCR-experiment introduceras, kommer falska positiva oundvikligen att inträffa.

Som visas i figuren nedan förstärkte den negativa kontrollen också motsvarande band av intresse:

1.6

Den första delen av detta nummer om PCR-förorening och förebyggande introduceras här.Nästa nummer kommer att ge dig den andra delen "Förebyggande av PCR-produktkontamination", så håll utkik!


Posttid: 2017-jul-25