• Facebook
  • linkedin
  • Youtube

Buckal pinne/FTA-kort DNA-extraktionssats

Följande analys av möjliga problem iBuccalsvabb/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Reningskolonnen är igensatt

 

 

I detta kit, i den genomiska DNA-extraktionsoperationen, adsorberas reningskolonnen direkt på provets enzymatiska lysblandning utan centrifugeringssteg, och reningskolonnen kan blockeras på grund av ofullständig enzymisering och hög viskositet hos provet.

Följande möjliga orsaker är följande:

1. Ofullständig enzymatisk nedbrytning av vävnadsprover.

Rekommendation: Provbehandlingstiden för Foregene Protease kan förlängas på lämpligt sätt eller så kan supernatanten tas efter centrifugering vid 12 000 rpm (~13 400× g) i 5 min.

2. Överdriven användning av vävnadsprover eller stora vävnader.

Rekommendation: Det är bäst att inte överstiga 1Buccal svabba i provet;om provet är för stort, öka dosen av buffert ST1, Foregene Protease, buffert ST2 i enlighet med detta.

3. Provets viskositet är för hög.

Rekommendation: Prover kan spädas på lämpligt sätt med 10 mM Tris-HCl före genomisk DNA-extraktion.

4. Fragment av blodkortet har sugits.

Rekommendation: Den övergående centrifugeringstiden i steg 6 av genomisk extraktion av blodfläckar (FTA-kort) kan förlängas på lämpligt sätt.

 

Lågt utbyte eller inget DNA

 

Det finns ofta en mängd olika faktorer som påverkar genomiskt DNA-utbyte, inklusive provursprung, provlagringsförhållanden, provberedning, manipulation, etc.

Genomiskt DNA kan inte erhållas under extraktion

De möjliga orsakerna är följande:

1. Felaktig bevarande av prover eller lagring för länge leder till genomisk DNA-nedbrytning.

Rekommendation: Orala pinnprover bör helst tas nyligen, och det är inte tillrådligt att använda konserverade pinnprover för genomiska DNA-extraktionsoperationer;blodfläcksprover ska säkerställa att kvaliteten är kvalificerad och lagringstiden bör inte vara för lång.

2. För lite vävnadsanvändning kan leda till ingen extraktion av motsvarande genomiska DNA.

Rekommendation: Följbuccal provtagningsinstruktioner för pinnprover i operationsguiden och torka så många gånger som möjligt så att tillräckligt med celler kan fästas på den orala pinnen för genomisk DNA-extraktion;för extraktion av blodfläckar kan skärområdet för blodfläckar ökas på lämpligt sätt.

3. Foregene Protease konserveras felaktigt, vilket resulterar i en minskning av dess aktivitet eller inaktivering.

Rekommendation: Bekräfta lagringsförhållandena förForegene Protease eller ersätt det med ett nytt Foregene Protease för enzymatisk reaktion.

4. Felaktig konservering av satsen eller lagringstiden är för lång, vilket resulterar i att vissa komponenter i satsen går sönder.

Rekommendation: Köp en nyBuccal svabba DNAisolering kit för relaterade procedurer.

5. Buffert WB tillsätter inte absolut etanol.

Rekommendation: Bekräfta att buffert WB tillför korrekt volym absolut etanol.

6. Eluenten är inte korrekt tillsatt till silikonfilmen.

Rekommendation: Lägg till 65°Cförvärmt elueringsmedel faller till mitten av silikonmembranet och låt stå i rumstemperatur i 5 minuter för att öka elueringseffektiviteten.

Low-yield genomiskt DNA isolerat

Följande möjliga orsaker är följande:

1. Felaktig bevarande av prover eller lagring för länge leder till genomisk DNA-nedbrytning.

Rekommendation: Orala pinnprover tas helst färska, och konserverade pinnprover bör inte användas för genomisk DNA-extraktion.

2. Om mängden vävnadsprov är för liten kommer det extraherade genomiska DNA-innehållet att vara mindre.

Rekommendation: Följ instruktionerna för provtagning av oral pinne i bruksanvisningen, torka så många gånger som möjligt så att tillräckligt med celler kan fästas på den orala pinnprover för genomisk DNA-extraktion.

3. Foregene Protease konserveras felaktigt, vilket resulterar i en minskning av dess aktivitet eller inaktivering.

Rekommendation: Bekräfta lagringsförhållandena förthe Foregene Protease eller ersätt den med en ny Foregene Protease för enzymatisk reaktion.

4. Elueringsproblem.

Rekommendation: Använd buffert EB för eluering;om du använder ddH2O eller andra elueringsmedel, bekräfta att eluatets pH är mellan 7,0-8,5.

5. Eluatet tillsätts inte droppvis korrekt.

Rekommendation: Tillsätt eluentdroppar till mitten av silikonmembranet och låt stå i rumstemperatur i 5 minuter för att öka elueringseffektiviteten.

6. Elueringsvätskan ackumuleras för lite.

Rekommendation: Använd elueringsmedel för genomisk DNA-eluering enligt instruktionerna, åtminstoneinget mindre än 15μl.

Loj renhet of genomiskt DNAisolerat

Låg genomisk DNA-renhet kan leda till misslyckande eller otillfredsställande resultat av nedströmsexperiment, såsom: enzymer kan inte skäras upp, PCR kan inte få genfragmentet av intresse, etc.

De möjliga orsakerna är följande:

1. Heteroproteinförorening, RNA-förorening.

Analys: Reningskolonnen tvättades inte med Buffer PW;buffert PW tvättreningskolonnen tvättades inte med korrekt centrifugalhastighet.

Rekommendation: Se till att det inte finns någon utfällning i supernatanten innan du tillsätter etanol;se till att tvätta reningskolonnen enligt instruktionerna, och detta steg kan inte utelämnas.

2. Orenhet jonförorening.

Analys: Buffer WB tvättreningskolonn utelämnades eller tvättades endast en gång, vilket resulterade i kvarvarande jonkontamination.

Rekommendation: Se till att tvätta Buffer WB 2 gånger enligt anvisningarna för att avlägsna kvarvarande joner så mycket som möjligt.

3. RNA-enzymkontamination.

Analys: Främmande RNaser sattes till bufferten;Buffert-PW-tvättningsoperationen var felaktig, vilket resulterade i RNas-rester, vilket påverkar nedströms RNA-experimentella operationer, såsom in vitro-transkription.

Rekommendation: Foregene series nukleinsyraisolation kit kan ta bort RNA utan ytterligare tillsats av RNas,Således buckal swab/FTA-kort DNA-isoleringssatsbehöver't tillsätt RNas;se till att följa instruktionerna för buffert PW tvättreningskolonn, och detta steg kan inte utelämnas.

4. Etanolrest.

Analys: Buffert WB utförde inte tomrörscentrifugering efter tvättning av reningskolonnen.

Rekommendation: Utför korrekt centrifugering av tomma rör enligt instruktionerna.

5. Andra föroreningar.

Analys: Sparade prover eller specialprover förbehandlas inte.

Rekommendation: Förbehandla provet noggrant enligt instruktionerna.

 


Posttid: Mar-18-2022