• Facebook
  • linkedin
  • Youtube

Antikroppar, även kallade immunglobuliner (Ig), är glykoproteiner som specifikt binder till antigener.
 
Konventionella antikroppspreparat framställs genom immunisering av djur och uppsamling av antiserum.Därför innehåller antiserum vanligtvis antikroppar mot andra orelaterade antigener och andra proteinkomponenter i serumet.Allmänna antigenmolekyler innehåller oftast flera olika epitoper, så konventionella antikroppar är också en blandning av antikroppar mot flera olika epitoper.Även de konventionella serumantikropparna riktade mot samma epitop är fortfarande sammansatta av heterogena antikroppar producerade av olika B-cellkloner.Därför kallas konventionella serumantikroppar även polyklonala antikroppar, eller förkortat polyklonala antikroppar.
 
Monoklonal antikropp (monoklonal antikropp) är en mycket enhetlig antikropp som produceras av en enda B-cellsklon och endast riktad mot en specifik epitop.Det framställs vanligtvis med hybridomteknologi - hybridomantikroppsteknologi är baserad på cellfusionsteknologi, som kombinerar B-celler med förmågan att utsöndra specifika antikroppar och myelomceller med oändlig tillväxtkapacitet till B-cellshybridom.Denna hybridomcell har egenskaperna hos en modercell.Det kan föröka sig på obestämd tid och odödligt in vitro som myelomceller, och det kan syntetisera och utsöndra specifika antikroppar som mjältlymfocyter.Genom kloning kan en monoklonal linje härledd från en enda hybridomcell, det vill säga en hybridomcellinje, erhållas.Antikropparna som den producerar är mycket homogena antikroppar mot samma antigena determinant, det vill säga monoklonala antikroppar.
 
Antikroppar existerar som en eller flera Y-formade monomerer (dvs monoklonala antikroppar eller polyklonala antikroppar).Varje Y-formad monomer är sammansatt av 4 polypeptidkedjor, inklusive två identiska tunga kedjor och två identiska lätta kedjor.Lätt kedja och tung kedja namnges efter sin molekylvikt.Toppen av den Y-formade strukturen är den variabla regionen, som är antigenbindningsstället.(Utdrag från Detai Bio-Monoclonal Antibody Concept)
 
Antikroppsstruktur
1Tung kedja
Det finns fem typer av tunga Ig-kedjor från däggdjur, namngivna med de grekiska bokstäverna α, δ, ε, γ och μ.Motsvarande antikroppar kallas IgA, IgD, IgE, IgG och IgM.Olika tunga kedjor skiljer sig åt i storlek och sammansättning.α och γ innehåller cirka 450 aminosyror, medan μ och ε innehåller cirka 550 aminosyror.
Varje tung kedja har två regioner: den konstanta regionen och den variabla regionen.Alla antikroppar av samma typ har samma konstanta region, men det finns skillnader mellan antikroppar av olika typer.De konstanta regionerna av de tunga kedjorna γ, α och δ är sammansatta av tre Ig-domäner i tandem, med en gångjärnsregion för att öka dess flexibilitet;de konstanta regionerna av de tunga kedjorna μ och ε är sammansatta av 4 Ig-domäner.Den variabla regionen av den tunga kedjan av antikroppen som produceras av olika B-celler är olika, men den variabla regionen av antikroppen som produceras av samma B-cell eller cellklon är densamma, och den variabla regionen av varje tung kedja är cirka 110 aminosyror lång., Och bildar en enda Ig-domän.
 
Lätt kedja
Det finns bara två typer av lätta kedjor hos däggdjur: lambdatyp och kappatyp.Varje lätt kedja har två länkade domäner: en konstant region och en variabel region.Längden på den lätta kedjan är cirka 211~217 aminosyror.De två lätta kedjorna som finns i varje antikropp är alltid desamma.För däggdjur har den lätta kedjan i varje antikropp endast en typ: kappa eller lambda.Hos vissa lägre ryggradsdjur, som broskfiskar (broskfiskar) och benfiskar, finns även andra typer av lätta kedjor som typen iota (iota).
 
Fab- och Fc-segment
Fc-segmentet kan kombineras direkt med enzymer eller fluorescerande färgämnen för att märka antikroppar.Det är den del där antikroppen nitar på plattan under ELISA-processen, och det är också den del där den andra antikroppen känns igen och binds i immunoutfällning, immunblotting och immunhistokemi.Antikroppar kan hydrolyseras till två F(ab)-segment och ett Fc-segment av proteolytiska enzymer såsom papain, eller så kan de brytas från gångjärnsregionen av pepsin och hydrolyseras till ett F(ab)2-segment och ett Fc-segment.IgG-antikroppsfragment är ibland mycket användbara.På grund av avsaknaden av Fc-segmentet kommer F(ab)-segmentet inte att fällas ut med antigenet, och det kommer inte heller att fångas upp av immunceller i in vivo-studier.På grund av de små molekylära fragmenten och avsaknaden av tvärbindningsfunktion (på grund av bristen på Fc-segment) används Fab-segmentet vanligtvis för radiomärkning i funktionella studier, och Fc-segmentet används huvudsakligen som ett blockerande medel vid histokemisk färgning.
 
Variabla och konstanta regioner
Den variabla regionen (V-regionen) är belägen vid 1/5 eller 1/4 (innehållande cirka 118 aminosyrarester) av H-kedjan nära N-terminalen och 1/2 (innehållande cirka 108-111 aminosyrarester) nära N-terminalen av L-kedjan.Varje V-region har en peptidring bildad av disulfidbindningar inom kedjan, och varje peptidring innehåller cirka 67 till 75 aminosyrarester.Sammansättningen och arrangemanget av aminosyror i V-regionen bestämmer antikroppens antigenbindningsspecificitet.På grund av de ständigt föränderliga typerna och sekvensen av aminosyror i V-regionen kan många typer av antikroppar med olika bindande antigenspecificiteter bildas.V-regionerna i L-kedjan och H-kedjan kallas VL respektive VH.I VL och VH har aminosyrasammansättningen och sekvensen för vissa lokala regioner en högre grad av variation.Dessa regioner kallas hypervariabla regioner (HVR).Aminosyrasammansättningen och arrangemanget av icke-HVR-delarna i V-regionen är relativt konservativa, vilket kallas ramregionen.Det finns tre hypervariabla regioner i VL, vanligtvis belägna vid aminosyraresterna 24 till 34 respektive 89 till 97.De tre HVR:erna för VL och VH kallas HVR1, HVR2 respektive HVR3.Forskningen och analysen av röntgenkristalldiffraktion visade att den hypervariabla regionen verkligen är platsen där antikroppsantigenet binder, så det kallas den komplementaritetsbestämmande regionen (CDR).HVR1, HVR2 och HVR3 för VL och VH kan kallas CDR1, CDR2 respektive CDR3.I allmänhet har CDR3 en högre grad av hypervariabilitet.Den hypervariabla regionen är också den huvudsakliga platsen där de idiotypiska determinanterna för Ig-molekyler finns.I de flesta fall spelar H-kedjan en viktigare roll för att binda till antigenet.
2Den konstanta regionen (C-regionen)är belägen vid 3/4 eller 4/5 (ungefär från aminosyra 119 till C-terminalen) av H-kedjan nära C-terminalen och 1/2 (innehåller cirka 105 aminosyrarester) nära C-terminalen av L-kedjan.Varje funktionell region av H-kedjan innehåller cirka 110 aminosyrarester och innehåller en peptidring sammansatt av 50-60 aminosyrarester sammankopplade med disulfidbindningar.Aminosyrasammansättningen och arrangemanget av denna region är relativt konstant i samma djur-Ig-isotyp L-kedja och samma typ H-kedja.Detsamma, det kan bara binda specifikt till motsvarande antigen, men strukturen för dess C-region är densamma, det vill säga den har samma antigenicitet.Hästens anti-humana IgG sekundära antikroppen (eller anti-antikroppen) kan kombineras med de två En kombination av antikroppar (IgG) mot olika exotoxiner förekommer.Detta är en viktig grund för framställning av sekundära antikroppar och applicering av fluorescein, isotoper, enzymer och andra märkta antikroppar.
 
 
Relaterade produkter:
Cell Direct RT-qPCR-kit

 

 


Posttid: 2021-09-30