Foreasy Taq DNA-polymeras
Beskrivning
Foreasy Taq DNA Polymerase är ett nytt Taq-enzym som uttrycks i Escherichia coli-teknikbakterier genom genrekombinationsteknologi.Enzymet i sig har en viss varmstartaktivitet och kan användas för konventionell PCR och qPCR;den har 5'→3' DNA-polymerasaktivitet och 5'→3' exonukleasaktivitet, men ingen 3'→5' exonukleasaktivitet.
Kitkomponenter
Komponent | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
Foreasy Taq DNA-polymeras(5 U/μL) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 ml) | 500 KU (100 ml) |
2× Taq-reaktionsbuffert | 25 ml × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml x 25 |
Egenskaper & fördelar
- Hög specificitet: Enzymet har en viss varmstartaktivitet.
- Snabb förstärkning: 10 sek/kb.
- Mycket anpassningsbar mall: kan användas för att effektivt amplifiera GC High value, olika svårförstärkta DNA-mallar.
- Stark trohet: vanligt Taq Enzyme 6 gånger.
- Stark termisk stabilitet: Den kan placeras vid 37 °C i en vecka och bibehåller mer än 90 % aktivitet
Kitapplikation
Olika PCR/qPCR-system och direkta PCR-system
PCR-amplifiering av DNA-fragment
DNA-märkning
DNA-sekvensering
PCR A-svansad
U Definition
1U: Mängden enzym som krävs för att införliva 10 nmol deoxinukleotider i syraolösligt material med användning av aktiverat laxsperma-DNA som mall/primer i 30 minuter vid 74°C.
Reaktionsförhållande
Temperatur | Tid | Cykel |
37°C | 5 min | 1 |
94°C | 5 min | 1 |
94°C | 10 sek | 35 |
60°C | 10 sek | |
72°C | 20 sek/kb | |
72°C | 2 min | 1 |
Lagring
-20 ± 5 °C i 2 år eller vid -80 °C för långtidsförvaring.
Inga förstärkningssignaler
1. Taq DNA-polymeraset i kitet förlorar sin aktivitet på grund av felaktig förvaring eller utgång av kitet.
Rekommendation: Bekräfta förvaringsvillkoren för kitet;tillsätt igen en lämplig mängd Taq DNA-polymeras till PCR-systemet eller köp ett nytt PCR-kit i realtid för relaterade experiment.
2. Det finns många hämmare av Taq DNA-polymeras i DNA-mallen.
Förslag: Rensa mallen igen eller minska mängden mall som används.
3. Mg2+-koncentrationen är inte lämplig.
Rekommendation: Mg2+-koncentrationen av den 2× Real PCR-blandning vi tillhandahåller är 3,5 mM.Men för vissa speciella primers och mallar kan Mg2+-koncentrationen vara högre.Därför kan du direkt lägga till MgCl2 för att optimera Mg2+-koncentrationen.Det rekommenderas att öka Mg2+ 0,5 mM varje gång för optimering.
4. PCR-amplifieringsförhållandena är inte lämpliga och primersekvensen eller koncentrationen är felaktig.
Förslag: bekräfta att primersekvensen är korrekt och att primern inte har brutits ned;Om förstärkningssignalen inte är bra, försök att sänka anlöpningstemperaturen och justera primerkoncentrationen på lämpligt sätt.
5. Mängden mall är för liten eller för mycket.
Rekommendation: Utför malllineariseringsgradientspädning och välj mallkoncentrationen med den bästa PCR-effekten för realtids-PCR-experiment.
NTC har för högt fluorescensvärde
1. Reagenskontamination orsakad under drift.
Rekommendation: Ersätt med nya reagenser för realtids-PCR-experiment.
2. Kontaminering inträffade under beredningen av PCR-reaktionssystemet.
Rekommendation: Vidta nödvändiga skyddsåtgärder under drift, såsom: bära latexhandskar, använda pipettspets med filter, etc.
3. Primerna bryts ned och nedbrytningen av primrarna kommer att orsaka ospecifik amplifiering.
Förslag: Använd SDS-PAGE-elektrofores för att detektera om primrarna är nedbrutna och ersätt dem med nya primers för realtids-PCR-experiment.
Primer-dimer eller icke-specifik amplifiering
1. Mg2+-koncentrationen är inte lämplig.
Rekommendation: Mg2+-koncentrationen av den 2× Real PCR EasyTM Mix vi tillhandahåller är 3,5 mM.Men för vissa speciella primers och mallar kan Mg2+-koncentrationen vara högre.Därför kan du direkt lägga till MgCl2 för att optimera Mg2+-koncentrationen.Det rekommenderas att öka Mg2+ 0,5 mM varje gång för optimering.
2. PCR-glödgningstemperaturen är för låg.
Förslag: Öka PCR-glödgningstemperaturen med 1 ℃ eller 2 ℃ varje gång.
3. PCR-produkten är för lång.
Rekommendation: Längden på realtids-PCR-produkten bör vara mellan 100-150 bp, inte mer än 500 bp.
4. Primerna bryts ned och nedbrytningen av primrarna kommer att leda till uppkomsten av specifik amplifiering.
Förslag: Använd SDS-PAGE-elektrofores för att detektera om primrarna är nedbrutna och ersätt dem med nya primers för realtids-PCR-experiment.
5. PCR-systemet är felaktigt, eller så är systemet för litet.
Förslag: PCR-reaktionssystemet är för litet gör att detektionsnoggrannheten minskar.Det är bäst att använda reaktionssystemet som rekommenderas av det kvantitativa PCR-instrumentet för att köra realtids-PCR-experimentet igen.
Dålig repeterbarhet av kvantitativa värden
1. Instrumentet fungerar inte.
Förslag: Det kan finnas fel mellan varje PCR-hål i instrumentet, vilket resulterar i dålig reproducerbarhet under temperaturhantering eller detektering.Kontrollera enligt instruktionerna för motsvarande instrument.
2. Provets renhet är inte bra.
Rekommendation: Orena prover kommer att leda till dålig reproducerbarhet av experimentet, vilket inkluderar renheten av mallen och primers.Det är bäst att återrena mallen, och primrarna renas bäst med SDS-PAGE.
3. Förberedelse- och lagringstiden för PCR-systemet är för lång.
Förslag: Använd PCR-systemet i realtid för PCR-experiment omedelbart efter beredning, och låt det inte stå åt sidan för länge.
4. PCR-amplifieringsförhållandena är inte lämpliga och primersekvensen eller koncentrationen är felaktig.
Förslag: bekräfta att primersekvensen är korrekt och att primern inte har brutits ned;Om förstärkningssignalen inte är bra, försök att sänka anlöpningstemperaturen och justera primerkoncentrationen på lämpligt sätt.
5. PCR-systemet är felaktigt, eller så är systemet för litet.
Förslag: PCR-reaktionssystemet är för litet gör att detektionsnoggrannheten minskar.Det är bäst att använda reaktionssystemet som rekommenderas av det kvantitativa PCR-instrumentet för att köra realtids-PCR-experimentet igen.