Buccal Swab/FTA-kort DNA-isoleringskit Genomisk DNA-extraktion eller reningssats från Buccal Swabs
Kit Beskrivning:
Rena snabbt högkvalitativt genomiskt DNA från buckala pinnprover/FTA-kort.
◮Ingen RNas-kontamination:Den DNA-bara kolumnen som tillhandahålls av kitet gör det möjligt att ta bort RNA från det genomiska DNA:t utan att lägga till RNas under experimentet, vilket förhindrar att laboratoriet kontamineras av exogent RNas.
◮Snabb hastighet:Foregene Protease har högre aktivitet än liknande proteaser och smälter vävnadsprover snabbt;operationen är enkel och den genomiska DNA-extraktionen kan slutföras inom 20-80 minuter.
◮Bekväm:Centrifugeringen utförs vid rumstemperatur och det finns inget behov av 4°C lågtemperaturcentrifugering eller etanolutfällning av DNA.
◮Säkerhet:Ingen organisk reagensextraktion krävs.
◮Hög kvalitet:Det extraherade genomiska DNA:t har stora fragment, inget RNA, inget RNas och extremt lågt joninnehåll, vilket kan uppfylla kraven i olika experiment.
◮Mikroelueringssystem:Det kan öka koncentrationen av genomiskt DNA, vilket är bekvämt för nedströms detektion eller experiment.
Beskrivning
Detta kit tillhandahåller en effektiv och snabb metod för att erhålla högkoncentration genomiskt DNA från buckala pinnar och FTA-kort (blodfläckar).Använder vårt företag's unika DNA-bara kiselmembranspinkolonn och formel, kombinerad med Foregene Protease, hög koncentration, högkvalitativt genomiskt DNA kan extraheras på 80 minuter.Den specialdesignade lilla reningskolonnen binder genomiskt DNA, och DNA:t kan elueras med en liten mängd (15 μl) elueringssystem för att öka koncentrationen av det erhållna genomiska DNA:t, vilket är bekvämt för nedströms detektion eller experiment.Satsen kan bearbeta ett eller flera prover åt gången, och reningsprocessen kräver inte extraktion av organiska ämnen som fenol, kloroform och tidskrävande isopropanol eller etanolfällning, och operationen är enkel och tidsbesparande.
Specifikationer
50 förberedelser
Kitkomponenter
| Buffert ST1 |
| Buffert ST2 |
| Linjär akrylamid |
| Buffert PW |
| Buffert WB |
| Buffert EB |
| Foregene Protease |
| Kolumn endast för DNA |
| Instruktioner |
Egenskaper & fördelar
-Ingen RNas-kontamination: Kolumnen med endast DNA som tillhandahålls av kitet gör det möjligt att ta bort RNA från genomiskt DNA utan att tillsätta RNas under experimentet, vilket undviker att laboratoriet kontamineras av exogent RNas.
-Snabb hastighet: Foregene Protease har högre aktivitet än liknande proteaser, smälter prover snabbt;enkel operation.
-Bekvämt: Centrifugeringen utförs vid rumstemperatur och det finns inget behov av 4°C lågtemperaturcentrifugering eller etanolutfällning av DNA.
-Säkerhet: Ingen organisk reagensextraktion krävs.
-Hög kvalitet: Det extraherade genomiska DNA:t har stora fragment, inget RNA, inget RNas och extremt lågt joninnehåll, vilket kan uppfylla kraven i olika experiment.
-Mikro-elueringssystem: Det kan öka koncentrationen av genomiskt DNA, vilket är bekvämt för nedströms detektion eller experiment.
Kitapplikation
Den är lämplig för rening av genomiskt DNA från följande prover: buckala pinnar, FTA-kort (blodfläckar).
Lagring och hållbarhet
-Detta kit kan förvaras i 12 månader under torra förhållanden vid rumstemperatur (15-25°C);om den behöver förvaras under en längre tid kan den förvaras vid 2-8°C.
Obs: Om lösningen förvaras vid låg temperatur är lösningen benägen att utfällas.Före användning, se till att placera lösningen i satsen i rumstemperatur under en viss tid.Vid behov, förvärm den i ett 37°C vattenbad i 10 minuter för att lösa upp fällningen och blanda den före användning.
-Foregene Protease-lösning har en unik formel, som är aktiv när den förvaras i rumstemperatur under lång tid (3 månader);dess aktivitet och stabilitet blir bättre när den förvaras vid 4°C, så det rekommenderas att förvara den vid 4°C, kom ihåg att inte förvara den vid -20°C.
Reningskolonnen är igensatt
I detta kit, i den genomiska DNA-extraktionsoperationen, adsorberas reningskolonnen direkt på provets enzymatiska lysblandning utan centrifugeringssteg, och reningskolonnen kan blockeras på grund av ofullständig enzymisering och hög viskositet hos provet.
Följande möjliga orsaker är följande:
1. Ofullständig enzymatisk nedbrytning av vävnadsprover.
Rekommendation: Provbehandlingstiden för Foregene Protease kan förlängas på lämpligt sätt eller så kan supernatanten tas efter centrifugering vid 12 000 rpm (~13 400 × g) i 5 minuter.
2. Överdriven användning av vävnadsprover eller stora vävnader.
Rekommendation: Det är bäst att inte överskrida 1 buckal pinne i provet;om provet är för stort, öka dosen av buffert ST1, Foregene Protease, buffert ST2 i enlighet med detta.
3. Provets viskositet är för hög.
Rekommendation: Prover kan spädas på lämpligt sätt med 10 mM Tris-HCl före genomisk DNA-extraktion.
4. Fragment av blodkortet har sugits.
Rekommendation: Den övergående centrifugeringstiden i steg 6 av genomisk extraktion av blodfläckar (FTA-kort) kan förlängas på lämpligt sätt.
Lågt utbyte eller inget DNA
Det finns ofta en mängd olika faktorer som påverkar genomiskt DNA-utbyte, inklusive provursprung, provlagringsförhållanden, provberedning, manipulation, etc.
Genomiskt DNA kan inte erhållas under extraktion
De möjliga orsakerna är följande:
1. Felaktig bevarande av prover eller lagring för länge leder till genomisk DNA-nedbrytning.
Rekommendation: Orala pinnprover bör helst tas nyligen, och det är inte tillrådligt att använda konserverade pinnprover för genomiska DNA-extraktionsoperationer;blodfläcksprover ska säkerställa att kvaliteten är kvalificerad och lagringstiden bör inte vara för lång.
2. För lite vävnadsanvändning kan leda till ingen extraktion av motsvarande genomiska DNA.
Rekommendation: Följ instruktionerna för provtagning av buckala pinnprover i operationsguiden och torka så många gånger som möjligt så att tillräckligt med celler kan fästas på den orala pinnprover för genomisk DNA-extraktion;för extraktion av blodfläckar kan skärområdet för blodfläckar ökas på lämpligt sätt.
3. Foregene Protease konserveras felaktigt, vilket resulterar i en minskning av dess aktivitet eller inaktivering.
Rekommendation: Bekräfta lagringsförhållandena för Foregene Protease eller ersätt det med ett nytt Foregene Protease för enzymatisk reaktion.
4. Felaktig konservering av satsen eller lagringstiden är för lång, vilket resulterar i att vissa komponenter i satsen går sönder.
Rekommendation: Köp ett nytt DNA-isoleringskit för buckal swab för relaterade procedurer.
5. Buffert WB tillsätter inte absolut etanol.
Rekommendation: Bekräfta att buffert WB tillför korrekt volym absolut etanol.
6. Eluenten är inte korrekt tillsatt till silikonfilmen.
Rekommendation: Tillsätt 65 °C förvärmda eluentdroppar till mitten av silikonmembranet och låt stå i rumstemperatur i 5 minuter för att öka elueringseffektiviteten.
Genomiskt DNA med låg avkastning isolerad
Följande möjliga orsaker är följande:
1. Felaktig bevarande av prover eller lagring för länge leder till genomisk DNA-nedbrytning.
Rekommendation: Orala pinnprover tas helst färska, och konserverade pinnprover bör inte användas för genomisk DNA-extraktion.
2. Om mängden vävnadsprov är för liten kommer det extraherade genomiska DNA-innehållet att vara mindre.
Rekommendation: Följ instruktionerna för provtagning av oral pinne i bruksanvisningen, torka så många gånger som möjligt så att tillräckligt med celler kan fästas på den orala pinnprover för genomisk DNA-extraktion.
3. Foregene Protease konserveras felaktigt, vilket resulterar i en minskning av dess aktivitet eller inaktivering.
Rekommendation: Bekräfta lagringsförhållandena för Foregene Protease eller ersätt det med ett nytt Foregene Protease för enzymatisk reaktion.
4. Elueringsproblem.
Rekommendation: Använd buffert EB för eluering;om du använder ddH2O eller andra elueringsmedel, bekräfta att eluatets pH är mellan 7,0-8,5.
5. Eluatet tillsätts inte droppvis korrekt.
Rekommendation: Tillsätt eluentdroppar till mitten av silikonmembranet och låt stå i rumstemperatur i 5 minuter för att öka elueringseffektiviteten.
6. Elueringsvätskan ackumuleras för lite.
Rekommendation: Använd elueringsmedel för genomisk DNA-eluering enligt instruktionerna, åtminstone inte mindre än 15 μl.
Låg renhet av genomiskt DNA isolerat
Låg genomisk DNA-renhet kan leda till misslyckande eller otillfredsställande resultat av nedströmsexperiment, såsom: enzymer kan inte skäras upp, PCR kan inte få genfragmentet av intresse, etc.
De möjliga orsakerna är följande:
1. Heteroproteinförorening, RNA-förorening.
Analys: Reningskolonnen tvättades inte med Buffer PW;buffert PW tvättreningskolonnen tvättades inte med korrekt centrifugalhastighet.
Rekommendation: Se till att det inte finns någon utfällning i supernatanten innan du tillsätter etanol;se till att tvätta reningskolonnen enligt instruktionerna, och detta steg kan inte utelämnas.
2. Orenhet jonförorening.
Analys: Buffer WB tvättreningskolonn utelämnades eller tvättades endast en gång, vilket resulterade i kvarvarande jonkontamination.
Rekommendation: Se till att tvätta Buffer WB 2 gånger enligt anvisningarna för att avlägsna kvarvarande joner så mycket som möjligt.
3. RNA-enzymkontamination.
Analys: Främmande RNaser sattes till bufferten;Buffert-PW-tvättningsoperationen var felaktig, vilket resulterade i RNas-rester, vilket påverkar nedströms RNA-experimentella operationer, såsom in vitro-transkription.
Rekommendation: Foregene-seriens nukleinsyraisoleringskit kan ta bort RNA utan ytterligare tillsats av RNas, så buckal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit behöver inte lägga till RNas;se till att följa instruktionerna för buffert PW tvättreningskolonn, och detta steg kan inte utelämnas.
4. Etanolrest.
Analys: Buffert WB utförde inte tomrörscentrifugering efter tvättning av reningskolonnen.
Rekommendation: Utför korrekt centrifugering av tomma rör enligt instruktionerna.
5. Andra föroreningar.
Analys: Sparade prover eller specialprover förbehandlas inte.
Rekommendation: Förbehandla provet noggrant enligt instruktionerna.
